نقد و بررسی
اتیدیوم بروماید
اتیدیوم بروماید
توضیحات کلی (اتیدیوم بروماید در الکتروفورز)
اتیدیوم بروماید رایجترین رنگآمیزی اسید نوکلئیک برای الکتروفورز PAGE یا ژل آگارز است. فلورسانس EtBr بااتصال به RNA دو رشتهای 21 برابر و در اتصال DNA دو رشتهای 25 برابر افزایش مییابد، بنابراین رنگزدایی پسزمینه با غلظت رنگ پایین (10 میکروگرم در میلیلیتر) ضروری نیست. این ماده در تعدادی از سنجشهای فلورمتری برای اسیدهای نوکلئیک استفادهشده است. نشان دادهشده است که به DNA تکرشتهای (اگرچه نه بهشدت) و DNA سه رشتهای متصل میشود. به دلیل توانایی آن در اتصال به DNA، EtBr یک مهارکننده DNA پلیمراز است.
این ماده DNA و RNA دو رشتهای را در هم میافکند و بهعنوان یک جهشزای تغییر چارچوب عمل میکند. همچنین میتوان آن را همراه با آکریدین اورنج برای تمایز بین سلولهای زنده، آپوپتوز و نکروز استفاده کرد.
ژل اتیدیوم بروماید
برای رنگآمیزی ژل پس از الکتروفورز، نمونهای از محلول اتیدیوم بروماید را تا 0.5 میکروگرم در میلیلیتر با آب رقیق کرده و ژل را به مدت 30-15 دقیقه در انکوبه قرار دهید. معمولاً نیازی به دستگیری نیست، اما در صورت نیاز به کاهش پسزمینه، میتوان آن را به مدت 15 دقیقه در آب انجام داد. سپس نوارهای DNA را میتوان در جعبه نور UV (طولموج 254 نانومتر) تشخیص داد. ان ماده همچنین میتواند با 0.5 میکروگرم در میلیلیتر در ژل و بافر جاری ترکیب شود و بلافاصله پس از الکتروفورز مشاهده شود.
اتیدیوم بروماید (هومیدیم بروماید، نمک کلرید هومیدیم کلرید) یک عامل بینابینی است که معمولاً بهعنوان برچسب فلورسنت (رنگ اسید نوکلئیک) در آزمایشگاههای زیستشناسی مولکولی برای فنهایی مانند الکتروفورز ژل آگارز استفاده میشود. معمولاً بهعنوان EtBr مخفف میشود که مخفف برمواتان نیز هست. برای جلوگیری از سردرگمی، برخی از آزمایشگاهها از مخفف EthBr برای این نمک استفاده کردهاند. هنگامیکه در معرض نور ماوراءبنفش قرار میگیرد، بارنگ نارنجی فلورسانس میشود و پس از اتصال به DNA تقریباً 20 برابر تشدید میشود. تحت نام هومیدیم، معمولاً از دهه 1950 در دامپزشکی برای درمان تریپانوزومیازیس در گاو استفاده میشود. بروز بالای مقاومت ضد میکروبی باعث میشود این درمان در برخی مناطق غیرعملی باشد، جایی که بهجای آن از کلرید ایزومتامیدیوم مربوطه استفاده میشود. علیرغم شهرت آن بهعنوان یک جهشزا، کنترل آن نسبتاً ایمن است.
اتیدیوم بروماید به انگلیسی، Ethidium bromide می شود.
کاربرد
در آزمایشگاههای زیستشناسی مولکولی برای فنهایی مانند الکتروفورز ژل آگارز استفاده میشود. معمولاً بهصورت مخفف EtBr شناخته میشود.
همچنین از این ماده برای کاهش تعداد کپی DNA میتوکندری در سلولهای در حال تکثیر استفاده میشود.
دمای نگهداری
دمای اتاق
0رای کاربران