آنزیم DNA Taq پلیمراز برند ATR-MEDUni Taq DNA Polymerase

آنزیم DNA Taq پلیمراز برند ATR-MED

توضیحات کلی – فعالیت اگزونوکلئازی dna پلیمراز

آنزیم Tag DNA پلیمراز یک DNA پلیمراز مقاوم‌ به‌ گرما است که فعالیت پلیمرازی ‘3 → ‘5 و فعالیت اگزونوکلئازی ‘3 → ‘5 دارد و فاقد فعالیت اگزونوکلئازی ‘5 → ‘3 است. آنزیم Tag DNA پلیمراز، از سویه اشرشیا کولی (E. coli) تخلیص می‌شود که بیان ژن DNA پلیمر را از Thermus aquaticus بر عهده دارد. در این آنزیم 94 کیلودالتونی هیچ اندونوکلئاز، اگزونوکلئاز یا DNA باکتریایی مشاهده نشده است.

Taq polymerase چیست

در پاسخ به این سوال که Taq polymerase چیست، می توان گفت که این محصول دارای ساختاری بهینه و مهندسی‌شده هست که با قرار داده شدن ناحیه‌های هیدورفیلیک در آنزیم، حلالیت و افینیتی آن نسبت به الگو DNA افزایش‌یافته و درنتیجه فعالیت این آنزیم دارای حساسیت و سرعت بیشتری نسبت به آنزیم وحشی آن هست و حاوی بافر بهینه‌شده همراه با Mg2+ جدا بوده که این آنزیم را قادر می‌سازد تا امپیلیکون با سایزهای مختلف را برای سنتز پوشش دهد.

انواع دی ان ای پلیمراز (انواع دنا پلیمراز)

در مورد انواع دی ان ای پلیمراز می توان گفت که دمای مطلوب آنزیم تگ دی ان ای پلیمراز برای فعالیت 75-80 درجه سانتی‌گراد است، با نیمه‌عمر بیشتر از 2 ساعت در 92.5 درجه سانتی‌گراد، 40 دقیقه در 95 درجه سانتی‌گراد و 9 دقیقه در 97.5 درجه سانتی‌گراد، و می‌تواند یک رشته 1000 جفت باز DNA را در کمتر از 10 ثانیه در 72 درجه سانتی‌گراد تکثیر کند. در دمای 75-80 درجه سانتی‌گراد ، آنزیم Tag DNA پلیمراز به‌سرعت پلیمریزاسیون مطلوب خود یعنی حدود 150 نوکلئوتید در ثانیه در هر مولکول آنزیم می‌رسد و هرگونه انحراف از دامنه دمایی مطلوب، سرعت فعالیت آنزیم را مهار می‌کند.

در دمای بالاتر از 90 درجه سانتی‌گراد، آنزیم Tag DNA پلیمراز فعالیت بسیار کمی را نشان می‌دهد یا اصلاً فعالیت نمی‌کند، و دست‌نخورده باقی می‌ماند. وجود یون‌های خاص در واکنش نیز بر فعالیت آنزیم تأثیر می‌گذارد. مقادیر کمی کلرید پتاسیم (KCl) و یون منیزیم باعث فعالیت آنزیمی Taq می‌شوند. پلیمراز Taq حداکثر در KCl 50 میلی مولار و غلظت مناسب Mg2+ که با غلظت مخلوط dNTPs تعیین می شود، فعال می‌شود. غلظت بالای KCl و Mg2+ باعث مهار فعالیت آنزیمی Taq می‌شود.

کاربرد آنزیم Taq polymerase

• TA کلونینگ
• PCR
• در تعیین مقدار رشد قارچ با روش PCR (واکنش زنجیره‌ای پلیمراز) و روش فتومتریک
• در RT (ترانسکریپتاز معکوس)-PCR معمولی
• در ژنوتایپینگ SSR (simple sequence repeats)

ویژگی و مزایا آنزیم تگ پلیمراز

• فعالیت پلیمرازی ‘3 → ‘5
• فعالیت اگزونوکلئازی ‘3 → ‘5
• فاقد فعالیت اگزونوکلئازی ‘5 → ‘3
• دارای حساسیت و سرعت بیشتر نسبت به آنزیم وحشی
• حلالیت و افینیتی بالا نسبت به الگو DNA

محتویات Taq polymerase

• آنزیم Tag DNA پلیمراز (5U/μL)
• بافر بهینه‌شده X10 (همراه با Mg2+)

ویژگی های آنزیم تگ پلیمراز

• خلوص بالا با استراتژی تخلیص ۶ مزحله ای بافر بهینه شده حاوی mgcl2 یا بدون mgcl2 بازدهی
• اختصاصیت و تلورانس بالا
• تکثیر قطعات تا 3 کیلو باز
• نیمه عمر ۴۰ دقیقه در دمای ۹۵ درجه سانتی گراد
• عدم حضور DNA سلول میزبان بیانی

دمای نگه‌داری آنزیم taq پلیمراز

دمای 20- درجه سانتی‌گراد

پروتکل

دانلود کتابچه‌ی راهنما Uni Taq DNA Polymerase
دانلود خلاصه کتابچه‌ی راهنما Uni Taq DNA Polymerase

قیمت خرید آنزیم تگ دی ان ای پلیمراز برند ATR-MED و یا فروش آنزیم Tag DNA پلیمراز برند ATR-MED