آنزیم DNA Pfu پلیمرازPfu DNA Polymerase

توضیحات

آنزیم DNA Pfu پلی مراز، یک DNA پلیمراز نوترکیب 90 کیلو دالتونی است که ژن مقاوم به حرارت آن از باکتری Pyrococcus furiosis جدا و به‌صورت نوترکیب بیان و تخلیص شده است. اریک ماتور در شرکت زیست فناوری Stratagene، مستقر در لاجولا، کالیفرنیا، آنزیم DNA Pfu پلی مراز را کشف کرد. آنزیم DNA Pfu پلیمراز، دارای فعالیت پلیمرازی ‘3 → ‘5 و فعالیت اگزونوکلئازی ‘3 → ‘5 هست و می‌تواند  میس مچ بازها را در طی روند PCR اصلاح کند.

سرعت الانگیشن آن 0.5 تا 1 کیلو باز در دقیقه است. این محصول، فعالیت نوکلئوتیدیل ترانسفراز انتهایی را نشان نمی‌دهد، بنابراین محصول تکثیر یافته می‌تواند به‌طوری مستقیم در وکتورهای blunt-ended استفاده شود. پایداری حرارت و قابليت پروف ريدينگ آنزیم DNA Pfu پلی مراز در مقایسه با آنزیم DNA Taq پلی مراز بیشتر است.

برخلاف آنزیم DNA Pfu پلی مراز، دارای فعالیت اگزونوکلئازی ‘3 → ‘5 است، به این معنی که DNA از انتهای ‘5 به 3’ همانندسازی می‌شود، فعالیت اگزونوکلئاز بلافاصله نوکلئوتیدهای اشتباه را از انتهای ‘3 DNA حذف می‌کند.

در نتیجه، قطعات PCR تولیدشده توسط آنزیم DNA Pfu پلی مراز دارای خطای کمتری نسبت به قطعات تولیدشده توسط آنزیم DNA Taq پلی مراز خواهد بود.

میزان خطای این آنزیم پلی مراز 1 در 1.3 میلیون جفت باز است و هنگام تکثیر قطعات 1 کیلوباز در PCR منجر به تولید محصولات جهش‌یافته به میزان 2.6% می‌شود. با این حال،سرعت  این آنزیم پلی مراز کند است و به‌طور معمول برای تکثیر یک قطعه 1 کیلوباز DNA در دمای 72 درجه سانتی‌گراد به 1-2 دقیقه زمان در هر چرخه نیاز دارد.

ازاین‌رو این آنزیم پلی مراز برای تکنیک‌هایی که به سنتز DNA باقابلیت اطمینان بالا نیاز دارند، از Taq DNA پلیمراز کارآمدتر است.

همچنین شما می توانید انواع محصولات بیولوژی مولکولی را در سایت آثل طب مشاهده نمایید و با مراجعه به سایت CUSABIO ، محصول را مشاهده نمایید .

کاربرد

• کلونینگ ژن
• بیان ژن
• آنالیز موتاسیون

ویژگی و مزایای

• خلوص بالای 97٪ تایید شده با SDS-PAGE
• عدم فعالیت آنزیمی اسید نوکلئیک اگزوژنوس
• عدم آلودگی با DNA میزبان بیانی
• مقاومت بالا به دمای محیط: عدم تغییر در فعالیت آنزیم پس از نگهداری در دمای اتاق به مدت یک هفته

محتویات

• آنزیم DNA Pfu پلی مراز (5U/μL)
• لودینگ بافر X6
• مخلوط dNTP (10 میلی‌مولار از هر dNTP)
• بافر بهینه‌شده (همراه با Mg²⁺)

درواقع با خرید آنزیم DNA Pfu پلیمراز به‌جای خرید یک آنزیم، یک مستر میکس با اجزا جدا که حاوی آنزیم DNA Pfu پلی مراز مجزا، لودینگ بافر X6 مجزا، مخلوط dNTP (10 میلی‌مولار از هر dNTP) و بافر بهینه‌شده (همراه با Mg²⁺) تهیه نموده‌اید که بسته به آزمایش خود می‌توانید اجزای مسترمیکس را ستاپ کند.

دمای نگه‌داری

دمای 20- درجه سانتی‌گراد