آنزیم DNAse I

دئوکسی ریبونوکلئاز I

توضیحات کلی

دئوکسی ریبونوکلئاز I یک اندونوکلئاز جداشده از پانکراس گاو است که DNA دو رشته‌ای و تک‌رشته‌ای را به الیگو و مونونوکلئوتیدها هضم می‌کند.  از DNase پانکراس گاو چهار ایزوآنزیم A ، B ، C و D با نقاط ایزوالکتریک 5.22، 4.96، 5.06 و 4.78 وجود دارد. شکل غالب DNase پانکراس گاو ایزوآنزیم A است.

کاربرد آنزیم DNAse I

از این ماده برای ایجاد نیک در DNA به عنوان اولین قدم برای ادغام بازهای لیبل شده در DNA استفاده می‌شود. آنزیم DNAse I برند سیگما در روند جداسازی وزیکول‌های غشای پلاسمایی از کشت Neurospora crassa استفاده شده است. همچنین از این محصول به همراه تریپسین برای تهیه سوسپانسیون تک‌سلولی از بیضه‌های موش استفاده شده است.

در یک مطالعه از این آنزیم برای مقایسه چندین روش برای کاهش آلودگی RNase در آماده‌سازی DNase استفاده شده است و همچنین در یک مطالعه به‌منظور بررسی تأثیر ترکیبات سدیم دودسیل سولفات سدیم (SDS) بر رﻧﺎﭼﻮره شدن آنزیم پس از الکتروفورز ژل پلی آکریل آمید استفاده شده است.

از ماده اشاره شذه برای از بین بردن DNA از نمونه های پروتئین استفاده می شود.

عملکرد بیوشیمیایی/فیزیولوژیکی آنزیم DNAse I

DNase I یک اندونوکلئاز است که با عملکرد در پیوندهای فسفودی استر مجاورت پیریمیدین ها پلی نوکلئوتیدهایی با ترمینال 5-فسفات ایجاد می‌کند. با حضورMg²⁺ ، DNAse I هر رشته DNA را به‌طور مستقل برش می‌دهد و سایت‌های برش تصادفی هستند. هر دو رشته DNA در حضور +Mg²  تقریباً در همان محل برش می‌شوند. کاتیونهای دو ظرفیتی مانند+Mg²⁺ ، Ca²⁺، Co² و +Zn² فعال‌کننده این آنزیم هستند. غلظت 5 میلی مولار +Ca² آنزیم را در مقابل هضم پروتئولیتیک حفاظت می‌کند. pH مطلوب بین 7 تا 8 است. ماده فوق الذکر از پانکراس گاو از چهار جزء کروماتوگرافیکالی قابل‌تشخیص، A ، B ، C و D تشکیل شده است که نسبت‌های مولی آن‌ها به ترتیب 1:1:4 است. فقط مقادیر جزئی از ایروآنزیم D وجود دارد. 2-مرکاپتواتانول، شلاتورها ، سدیم دودسیل سولفات (SDS) و اکتین از مهارکنندگان فعالیت آنزیم DNase I شناخته‌شده‌اند.

تعریف یونیت

یک Kunitz با استفاده از DNA، نوع I یا III به‌عنوان سوبسترا، تغییری در A₂₆₀ از 0.001 در دقیقه در میلی‌لیتر در pH 5.0 در دمای 25 درجه سانتی‌گراد ایجاد می‌کند.

آماده‌سازی

محلول 10 میلی‌گرم در میلی‌لیتر از DNAse I در کلرید سدیم 0.15 مولار ممکن است کمتر از 10% از فعالیت خود را هنگامی‌که به مدت یک هفته در دمای 20- درجه سانتی‌گراد نگهداری شود، از دست بدهد. این محصول در همان محلول در دمای 2-8 درجه سانتی‌گراد می‌توانند تقریباً 20% فعالیت خود را از دست می‌دهد؛ تا 5 ساعت در دمای 60 درجه سانتی‌گراد در pH 5-7 فعال است و در 68 درجه سانتی‌گراد کمتر از 10 دقیقه فعالیت خود را از دست می‌دهد؛ فعالیت خود را با سرعت 6%/ساعت در بافر استات (pH 5.0) و بافر تریس (pH 7.2) در غلظت 1 میلی‌گرم در میلی لیتر از دست می دهد.

دمای نگه‌داری

دمای 20- درجه سانتی‌گراد

پروتکل

دانلود کتابچه راهنما

در صورت داشتن هرگونه سوالاتی از قبیل: قیمت، فروش و یا خرید اینترنتی آنزیم DNAse I؛ قیمت، فروش و یا خرید اینترنتی دئوکسی ریبونوکلئاز I، قیمت آنزیم دی‌اکسی ریبونوکلئاز، دئوکسی ریبونوکلئات ′5 اولیگونوکلئوتیدو هیدرولاز، Deoxyribonuclease I، enzyme dnase 1 و … و یا نیاز به مشاوره علمی، با ما تماس حاصل فرمایید.