4-متیلومبلیفریل β-D-گالاکتوپیرانوزید4-Methylumbelliferyl β-D-galactopyranoside ≥99% (TLC)

توضیحات کلی 4-متیلومبلیفریل β-D-گالاکتوپیرانوزید

4-متیلومبلیفریل β-D-گالاکتوپیرانوزید یا MUG یا MUGA سوبسترای فلورسنت برای β-گالاکتوزیداز در لیزات سلولی و آماده‌سازی آنزیم‌های تخلیص شده با استفاده از دستگاه میکروپلیت فلورسانس یا فلورومتر است. استرهای آلی و معدنی و گلیکوزیدهای 7-هیدروکسی-4-متیل کومارین (4- متیلومبلیفرون، MU) یکی از رایج‌ترین سوبستراهای فلوروژنیک هستند. این سوبستراها فلوروفورهای کومارین فلورسنت آبی محلول در آب تولید می‌کنند. MUG یا MUGA حداکثر فلورسانس را در pH  بالای 10 ایجاد می‌کند.

ویژگی‌های باکتری‌ها را می‌توان با روش‌های مختلف به دست آورد. یک روش ساده، سریع و قابل‌اطمینان برای تعیین وجود آنزیم‌های باکتریایی اختصاصی در یک سویه شامل استفاده از شاخص‌های فلورسنت ایجادشده از واکنش کاتالیز شده توسط آنزیم‌های باکتریایی است. در این واکنش ، یک بستر غیر فلورسنت، مانند 4-متیلومبلیفریل β -D-گالاکتوپیرانوزید یا MUG یا MUGA، برای تولید یک محصول قابل مشاهده منحصربه‌فرد استفاده می‌شود. بنابراین، این سوبسترای غیر فلورسنت یک ابزار قدرتمند در تشخیص و طبقه‌بندی باکتری‌ها محسوب می‌شود.

4-متیلومبلیفریل β-D-گالاکتوپیرانوزید یا MUG یا MUGA در موارد زیر استفاده شده است:

• سوبسترای فلورسنت برای β-گالاکتوزیداز که محلول فلورسنت آبی را هنگام شکستن ایجاد می‌کند.
• برای تشخیص اشرشیا کلی در محیط فلوروژنیک استفاده می‌شود.

دمای نگه‌داری

دمای 20- درجه سانتی‌گراد

پروتکل و مستندات

پروتکل تشخیص آنزیم‌های باکتریایی با استفاده از 4-متیلومبلیفریل β-D-گالاکتوپیرانوزید یا MUG یا MUGA
15 میکرومول 4-متیلومبلیفریل β -D-گالاکتوپیرانوزید یا MUG یا MUGA را در 0.2 میلی‌لیتر دی متیل سولفوکسید DMSO حل کنید.
محلول را با مقدار 10 میلی‌لیتر با PBS در pH 7.3 رقیق کنید.
با استفاده از لوپ استریل تلقیح استریل، کلنی باکتریایی را از پلیت آگار بردارید.
لوپ تلقیح را روی کاغذ صافی قرار دهید.
اسمیر باکتریایی را با 2 قطره (30 قطره در میلی‌لیتر) محلول 4-متیلومبلیفریل β-D-گالاکتوپیرانوزید یا MUG یا MUGA بپوشانید.
در دمای 37 درجه سانتی‌گراد به مدت 10 دقیقه انکوبه کنید.
پس از انکوباسیون، اسمیر را با 2 قطره (30 قطره در میلی‌لیتر) سدیم هیدروکسید 0.1 نرمال انکوبه کنید.
توجه: سدیم هیدروکسید شدت فلورسانس را افزایش می‌دهد.
فلورسانس را با استفاده از لامپ UV با طول‌موج 365 نانومتر بررسی کنید.
توجه: وجود فلورسانس آبی نشان‌دهنده ترشح 4-متیلومبلیفریل است.