آنزیم Tag DNA پلیمراز

توضیحات کلی

آنزیم Taq DNA Polymerase یک DNA پلیمراز مقاوم‌به‌گرما است که فعالیت پلیمرازی ‘3 → ‘5 و فعالیت اگزونوکلئازی ‘3 → ‘5 دارد و فاقد فعالیت اگزونوکلئازی ‘5 → ‘3 است. آنزیم Tag DNA پلیمراز، از سویه اشرشیا کولی (E. coli) تخلیص می‌شود که بیان ژن DNA پلیمر را از Thermus aquaticus بر عهده دارد. در این آنزیم 94 کیلودالتونی هیچ اندونوکلئاز، اگزونوکلئاز یا DNA باکتریایی مشاهده نشده است.

این محصول دارای ساختاری بهینه و مهندسی‌شده هست که با قرار داده شدن ناحیه‌های هیدورفیلیک در آنزیم، حلالیت و افینیتی آن نسبت به الگو DNA افزایش‌یافته و درنتیجه فعالیت این آنزیم دارای حساسیت و سرعت بیشتری نسبت به آنزیم وحشی آن هست و حاوی بافر بهینه‌شده همراه با Mg²⁺  جدا بوده که این آنزیم را قادر می‌سازد تا امپیلیکون با سایزهای مختلف را برای سنتز پوشش دهد.

دمای مطلوب آنزیم Tag DNA پلیمراز برای فعالیت 75-80 درجه سانتی‌گراد است، با نیمه‌عمر بیشتر از 2 ساعت در 92.5 درجه سانتی‌گراد ، 40 دقیقه در 95 درجه سانتی‌گراد و 9 دقیقه در 97.5 درجه سانتی‌گراد، و می‌تواند یک رشته 1000 جفت باز DNA را در کمتر از 10 ثانیه در 72 درجه سانتی‌گراد تکثیر کند.  در دمای 75-80 درجه سانتی‌گراد ، آنزیم Tag DNA پلیمراز به‌سرعت پلیمریزاسیون مطلوب خود یعنی حدود 150 نوکلئوتید در ثانیه در هر مولکول آنزیم می‌رسد و هرگونه انحراف از دامنه دمایی مطلوب، سرعت فعالیت آنزیم را مهار می‌کند.

در دمای بالاتر از 90 درجه سانتی‌گراد، آنزیم Tag DNA پلیمراز فعالیت بسیار کمی را نشان می‌دهد یا اصلاً فعالیت نمی‌کند، و دست‌نخورده باقی می‌ماند.  وجود یون‌های خاص در واکنش نیز بر فعالیت آنزیم تأثیر می‌گذارد. مقادیر کمی کلرید پتاسیم (KCl) و یون منیزیم باعث فعالیت آنزیمی Taq می‌شوند. پلیمراز Taq حداکثر در KCl 50 میلی مولار و غلظت مناسب Mg²⁺  که با غلظت مخلوط dNTPs تعیین می شود،

فعال می‌شود. غلظت بالای KCl و Mg²⁺  باعث مهار فعالیت آنزیمی Taq می‌شود.

همچنین شما می توانید انواع محصولات بیولوژی مولکولی را در سایت آثل طب مشاهده نمایید و با مراجعه به سایت سیگماآلدریچ ، محصول را مشاهده نمایید .

کاربرد

• TA کلونینگ
• PCR
• در تعیین مقدار رشد قارچ با روش PCR (واکنش زنجیره‌ای پلیمراز) و روش فتومتریک
• در RT (ترانسکریپتاز معکوس)-PCR معمولی
• در ژنوتایپینگ SSR (simple sequence repeats)

ویژگی و مزایای

• فعالیت پلیمرازی ‘3 → ‘5
• فعالیت اگزونوکلئازی ‘3 → ‘5
• فاقد فعالیت اگزونوکلئازی ‘5 → ‘3
• دارای حساسیت و سرعت بیشتر نسبت به آنزیم وحشی
• حلالیت و افینیتی بالا نسبت به الگو DNA

محتویات

• آنزیم Tag DNA پلیمراز (5U/μL)
• بافر بهینه‌شده X10 (همراه با Mg²⁺)

دمای نگه‌داری

دمای 20- درجه سانتی‌گراد