یدونیتروتترازولیوم کلرید INTIodonitrotetrazolium chloride Used in colorimetric assays.

توضیحات کلی

یدونیتروتترازولیوم کلرید INT یک پیش ساز رنگ تترازولیوم است که در صورت احیاء یکرنگ بنفش فورمازان ایجاد می‌کند و در تست‌های مختلف استفاده می‌شود. در نظر گرفته می‌شود که واکنش‌پذیری بالاتری نسبت به برخی ترکیبات تترازولیوم، حداقل در رابطه با سوکسینات دهیدروژناز، با نتایج مطلوب با استفاده از غلظت 0.8 میلی مولار INT دارد. -یدو نیتروتترازولیوم ویولت INT به‌عنوان پذیرنده الکترون برای روش‌های رنگ سنجی: لاکتات دهیدروژناز، زانتین دهیدروژناز، لاکتیل-CoA دهیدروژناز، سوکسینات دهیدروژناز، BBM II کتولیسومراز، هیستیدینول دهیدروژناز و سایر هیدرولازهای دیگر استفاده می‌شود.

یدونیتروتترازولیوم کلرید INT برای رنگ‌آمیزی سلول‌ها استفاده شده است. از یدونیتروتترازولیوم کلرید به‌عنوان عامل اتصال در روش آنزیم D- آرابینیتول استفاده شده است. یدونیتروتترازولیوم کلرید به‌عنوان پذیرنده الکترون برای روش رنگ سنجی دهیدروژنازهای مختلف استفاده شده است. مترادف یدونیتروتترازولیوم کلرید شامل 2-(4-یدوفنیل)-3-(4-نیتروفنیل)-5-فنیل-2H-تترازولیوم کلراید، p-یدو نیتروتترازولیوم ویولت و INT است.

کاربرد:

یدونیتروتترازولیوم کلرید INT در موارد زیر استفاده شده است:

• یدونیتروتترازولیوم کلرید INT اغلب برای مشاهده فعالیت دهیدروژناز از نظر بافت‌شناسی
• همچنین در رنگ‌آمیزی وسترن بلات و به‌عنوان عامل رنگ‌آمیزی برای سنجش تشکیل کلنی آگار استفاده می‌شود.
• اندازه‌گیری فعالیت SDH (سوکسینات دهیدروژناز)، از کلرید یدونیتروترتازولیوم به‌عنوان عامل اکسیدکننده استفاده می‌شود که توسط سوکسینات دهیدروژناز کاهش می‌یابد.
• برای مطالعه فعالیت انتقال الکترون در خاک‌ها، رسوبات و کشت‌های آنزیمی خالص و همچنین فعالیت نوکلئوتید دی فسفات کیناز
• برای رنگ‌آمیزی سلول‌ها استفاده شده است

عملکرد بیوشیمیایی و فیزیولوژیکی یدونیتروتترازولیوم کلرید INT

نمک مونوترتازولیوم یدونیتروتترازولیوم کلرید INT ابتدا توسط اتکینسون و همکاران توصیف شد. یددار TTC (2،3،5-تری فنیل تترازولیوم کلرید) با λmax جذب 248 نانومتر است. رنگ تولید شده با احیاء این ترکیب یدونیترو یک فرمازان قرمز تا بنفش یا قهوه ای با حداکثر جذب در 485 تا 492 نانومتر (بسته به حلال) است. INT اغلب برای مشاهده فعالیت دهیدروژناز از نظر بافت‌شناسی و همچنین در رنگ‌آمیزی وسترن بلات و به‌عنوان عامل رنگ‌آمیزی برای سنجش تشکیل کلنی آگار استفاده می‌شود. سنجش فعالیت‌های دهیدروژناز وابسته به NAD یا NADP: دهیدروژناز وابسته به ⁺ NADیا ⁺NADP الکترون‌ها را از یک سوبسترا (اهداکننده الکترون، به‌عنوان‌مثال سوکسینات) به ⁺ NADیا ⁺NADP منتقل می‌کند و به ترتیب NADH و NADPH را تشکیل می‌دهد. سپس، انتقال نهایی هیدروژن به نمک تترازولیوم توسط NADH یا NADPH دهیدروژنازها (به‌عنوان‌مثال سوکسینات دهیدروژناز) کاتالیز می‌شود و منجر به احیاء INT و تشکیل INT- فورمازان نامحلول در آب می‌شود. 1 مول فورمازان برای هر مول سوکسینات که در حضور INT استفاده می‌شود، تولید می‌شود. برای روش‌های بافت‌شناسی ذکر این نکته ضروری است که INT-فورمازان در محل این دهیدروژناز اخیر رسوب می‌کند اما در محل فعالیت اصلی دهیدروژناز وابسته به وابسته به ⁺ NADیا ⁺NADP نیست.

دمای نگه‌داری

دمای 2 تا 8 درجه سانتی‌گراد