پودر تریپسین گرید کشت سلولTrypsin from porcine pancreas

توضیحات کلی پودر تریپسین

پودر تریپسین به دلیل عملکرد و تولرانس موثر نسبت به سلول‌های مختلف و ﻧﻮﺗﺮاﻟﻴﺰاﺳﻴﻮن القایی سرم، در دایجستشن بافت و جداسازی سلول‌های چسبنده از سطح فلاسک کشت کاربرد دارد.

مطالعه کنید >>> کیسه دیالیز

 کاربرد

پودر تریپسین گرید کشت سلول یا تریپسین از پانکراس خوک در موارد زیر استفاده شده است:

• برای تریپسین دایجستشن پپتیدها، از نسبت حدود 1: 100 به 1:20 برای تریپسین: پپتید استفاده کنید. کاربرد معمول این محصول در حذف و جداسازی سلول‌های چسبنده از سطح فلاسک کشت است. غلظت تریپسین لازم برای حذف و جداسازی سلول‌ها از بستر پلیت کشت سلول در درجه اول به نوع سلول و سن کشت بستگی دارد. از تریپسین برای تعلیق و کشت مجدد سلول‌ها در تحقیقات پروتئومیکس برای هضم پروتئین‌ها و هضم‌های مختلف در ژل استفاده شده است. پودر تریپسین در ارزیابی کریستالیزاسیون با استفاده از تکنیک‌های مبتنی بر غشا و در یک مطالعه برای تعیین میزان فولدینگ پروتئین استفاده شده است.
• از تریپسین موجود در پانکراس خوک برای هضم و دایجست استخوان مرغ استفاده شده است.
• همچنین پودر تریپسین گرید کشت سلول در جداسازی سلول‌های اندوتلیال لوتئال استفاده شده است.
• از تریپسین ممکن است برای جداسازی سلول‌های چسبنده از سطح ظرف کشت استفاده شود. سلول‌ها معمولاً با تریت تریپسین با یا بدون EDTA از بستر ظرف کشت خارج می‌شوند. دامنه غلظت تریپسین می‌تواند از 0.025٪ تا 0.5٪ بسته به فعالیت یا قدرت تریپسین، زمان‌های مختلف انکوباسیون و رده‌های مختلف سلولی متفاوت باشد.

عملکرد بیوشیمیایی و فیزیولوژیکی

تریپسین رزیدوهای لیزین و آرژنین پپتیدها را در ناحیه C-ترمینال می‌شکند. اگر یک رزیدوی اسیدی در دو طرف محل برش باشد، سرعت هیدرولیز واکنش تریپسین را کاهش می‌یابد و اگر یک باقیمانده پرولین در سمت کربوکسیل محل شکاف باشد، هیدرولیز متوقف می‌شود. pH مطلوب برای فعالیت تریپسین بین 7-9 است.

مطالعه کنید >>> آزمایش MTT چیست ؟

تریپسین همچنین می‌تواند برای شکستن پیوندهای استری و آمیدی از مشتقات سنتتیک اسیدهای آمینه عمل کند. ماده كلاته كننده EDTA یون‌های كلسیم و منیزیم که پیوندهای پپتیدی را كه تریپسین در آن‌ها عمل می‌کند، را پنهان می‌کند خنثی می‌کند و  به محلول‌ تریپسین اضافه می‌شود. حذف این یون‌ها فعالیت آنزیمی را افزایش می‌دهد. مهارکننده‌های سرین پروتئیناز، ازجمله DFP ، TLCK ، APMSF ، AEBSEF و آپروتینین، و غیره ، تریپسین را مهار می‌کنند.

تریپسین از یک پلی پپتید تک زنجیره‌ای که از 223  اسیدآمینه تشکیل شده است که با حذف هگزاپپتید N-ترمینال تریپسینوژن تولید می‌شود که در پیوند پپتیدی Lys – lle شکسته می‌شود.

توالی اسیدهای آمینه توسط 6 پیوند پل دی سولفید به‌هم‌پیوسته است. این شکل نیتیو تریپسین، بتا تریپسین است. بتا-تریپسین می‌تواند اتولیز شود و با تجزیه باقیمانده Lys-Ser، آلفا-تریپسین تولید کند. تریپسین عضوی از خانواده سرین پروتئاز است.

تريپسينيزاسيون فرآیند تفکیک سلولی است که با استفاده از آنزیم پروتئولیتیک تریپسین سلول‌های چسبنده را از فلاسک کشت جدا می‌کند. تریپسین هنگامی‌که به یک کشت سلول اضافه می‌شود، پروتئین‌هایی متصل‌کننده سلول به فلاسک کشت را می‌شکند.

تريپسينيزاسيون غالباً براي انتقال سلول به محیط کشت جدید استفاده می‌شود. هنگامی‌که روند تریپسین سازی به پایان رسید، سلول‌ها در حالت سوسپانس قرار می‌گیرند.

سلول‌ها اغلب در ظروفی کشت می‌شوند که به شکل فلاسک یا صفحه پلاستیکی هستند. در چنین ظروفی، سلول‌ها دارای محیط رشد متشکل از مواد مغذی ضروری موردنیاز برای تکثیر هستند و سلول‌ها هنگام رشد به ظرف و یکدیگر می‌چسبند.

این فرایند کشت سلولی یا کشت بافتی به روشی برای جداسازی سلول‌ها از ظرف و یکدیگر نیاز دارد. تریپسین ، آنزیمی که معمولاً در دستگاه گوارش یافت می‌شود ، می‌تواند برای “هضم” پروتئین‌های چسبندگی به ظرف و بین سلول‌ها هضم شود.

هنگامی‌که سلول‌ها از ظرف کشت شدند، لازم است تریپسین غیرفعال شود، زیرا پروتئین‌های سطح سلول نیز باگذشت زمان شکسته می‌شوند و این بر عملکرد سلول تأثیر می‌گذارد. تریپسین توسط سرم حاوی که کاتیون‌های دو ظرفیتی مانند کلسیم و منیزیم که درروند سیگنالینگ درون‌سلولی و درون‌سلولی نقش دارند، مهار می‌شود.

دمای نگه‌داری

دمای 20- درجه سانتی‌گراد

برای مشاهد محصول در سایت اصلی بر روی اینجا کلیک نمایید .