رنگهای مختلف در قسمتهای مختلف یک سلول یا بافت واکنش میدهند و تمرکز مییابند که از این خواص به عنوان یک مزیتی برای آشکار کردن بخشها یا نواحی خاص استفاده میشود. برخی از رایجترین رنگ های بیولوژیکی در زیر ذکر شده است. بجز در مواردی که مشخص شده است، همه این رنگها ممکن است در سلولها و بافتهایی که تثبیت شده اند، استفاده شوند. رنگهای حیاتی (مناسب برای استفاده با موجودات زنده) نیز ذکر شده است.
رنگ آکریدین اورنج
رنگ آمیزی آکریدین اورنج چیست؟ آکریدین نارنجی (Acridine Orange) یک رنگ فلورسنت از گروه رنگ های بیولوژیکی انتخابی اسید نوکلئیک با خواص کاتیونی مفید برای تعیین چرخه سلولی است. این رنگ بیولوژیکی به داخل سلول نفوذ پذیر بوده و با در هم آمیختگی با DNAو یا از طریق جاذبه بینابینی یا الکترواستاتیک با RNA پیوند برقرار میکند. آکریدین اورنج زینک کلراید دابل سالت وقتی به DNA متصل میشود، از نظر طیفی بسیار شبیه فلورسئین است و مانند فلورسئین، به عنوان یک رنگ غیر اختصاصی با رنگ آمیزی پس زمینه، سلولهای رنگ آمیزی شده در سطح یک نمونه جامد از بافت (رنگ آمیزی با نور پس زمینه فلورسانس) نیز مفید است.
بیسمارک براون
قهوهای بیسمارک (Bismarck Brown) یا قهوه ای بیسمارک Y یا قهوه ای منچستر به مخاط یا موسین های اسیدی رنگ زرد میدهد و یک رنگ قهوهای شدید به مَست سل میبخشد. یکی از ویژگیهای این رنگ بیولوژیکی این است که هر ساختار دیگری را که در اطراف آن است پاک کرده و کیفیت کنتراست (تضاد) را پایین میآورد. برای اینکه مفید باشد باید با رنگهای دیگر جفت شود. برخی از رنگهای مکمل استفاده شده در کنار قهوهای بیسمارک، هماتوکسیلین و تولویدین بلو هستند که کنتراست بهتری را در نمونه های بافت شناسی ایجاد میکنند.
رنگ کارمین
رنگ دانه کارمین (Carmine) از یک کرم پهن انگلی است. رنگ کارمین از گروه رنگ های بیولوژیکی با رنگ قرمز بسیار شدیدی است که برای رنگ آمیزی گلیکوژن استفاده میشود، در حالی که کارمین آلوم یک رنگ هستهای است. رنگهای کارمین معمولاً نیاز به استفاده از یک ماده تثبیت کننده مانند آلومینیوم، دارند.
برای اطلاع از قیمت کوماسی بلو و فروش برلیانت بلو کلیک کنید.
کرسیل ویولت
کرسیل ارغوانی (Cresyl Violet) به اجزای اسیدی سیتوپلاسم عصبی (به ویژه اجسام نیسل) یک رنگ ارغوانی میبخشد. این رنگ بیولوژیکی اغلب در تحقیقات مربوط به مغز استفاده میشود.
کریستال ویولت برای چیست؟ کریستال ویوله (Crystal Violet) از خانواده رنگ های بیولوژیکی است، هنگامی که با یک ماده تثبیت کننده مناسب ترکیب شود، دیواره های سلول را بنفش رنگ میکند.
موارد مصرف رنگ بیولوژیکی کریستال ویوله چیست؟
کریستال ویوله یک رنگ تری فنیل متان است که در بافت شناسی و در روش گرم برای طبقه بندی باکتری ها و رنگ آمیزی قارچ ها استفاده می شود. این رنگ بعنوان ایندیکاتور pH ( زرد به بنفش در نقطه pH = 1.6) نیز عمل میکند.
خطرات کریستال ویوله:
آیا کریستال ویوله یک ماده سرطان زا است؟ همانطور که اشاره شد کریستال ویوله یک ماده رنگی تری فنیل متان است که به عنوان ماده ای زیست خطرناک در نظر گرفته می شود زیرا سمی و سرطان زاست.
نحوه ساخت کریستال ویولت :
2 گرم کریستال ویولت را در 20 میلی لیتر الکل اتیلیک 95٪ حل کنید. 0.8 گرم آمونیوم اگزالات مونوهیدرات را در 80 میلی لیتر آب دیونیزه حل کنید. محلولهای کریستال ویوله و اگزالات آمونیوم را مخلوط کنید تا رنگ بنفش بنفش ایجاد شود. اگر نیاز بود رنگ را فیلتر کنید.
DAPI
رنگ DAPI یک رنگ هسته ای فلورسنت است، که توسط نور فرا بنفش (UV) تحریک میشود و هنگام اتصال به DNA، فلورسانس آبی قوی را نشان میدهد و در رنگ آمیزی هسته سلول کاربرد دارد. DAPI به تکرارهای غنی از A = T کروموزومها متصل میشود. DAPI،عضو خانواده رنگ های بیولوژیکی همچنین با میکروسکوپ معمولی قابل مشاهده نیست و ممکن است در سلولهای زنده یا تثبیت شده استفاده شود. سلولهای رنگ آمیزی شده به DAPI بعنوان نشانگری برای شمارش سلول ها مناسب هستند.
برای مشاهده پروتکل رنگ آمیزی DAPI و خرید رنگ DAPI کلیک کنید.
ائوزین
از ائوزین (Eosin) اغلب بعنوان ضد رنگ (رنگ آمیزی متضاد) هماتوکسیلین در روش رنگ آمیزی هماتوکسین ائوزین استفاده میشود و به اجزای سیتوپلاسمی، غشای سلول و برخی ساختارهای خارج سلولی رنگ صورتی یا قرمز میدهد. این عضو از خانواده رنگ های بیولوژیکی رنگ قرمز شدیدی به گلبولهای قرمز خون میدهد. ائوزین یک رنگ اسیدی است: دارای بار منفی است (فرمول کلی رنگهای اسیدی: Na+ dye– بوده) و ساختارهای بازی (یا اسیدوفیل) را به رنگ قرمز یا صورتی رنگ آمیزی می کند. و گاهی اوقات “ائوزینوفیلیک” نامیده می شود. هماتوکسیلین دقیقاً یک رنگ بازی نیست، اما با یک ماده “تثبیت کننده” استفاده می شود که باعث می شود این رنگ به عنوان یک رنگ بازی (بازوفیلی) عمل کند.
ائوزین همچنین ممکن است به عنوان ضد رنگ در برخی از انواع رنگ آمیزی گرم و روش های دیگر استفاده شود. در واقع دو ترکیب بسیار مشابه به هم وجود دارد که معمولاً به آنها ائوزین گفته میشود. بیشتر اوقات ائوزین Y استفاده میشود (که به آن ائوزین Y ws یا ائوزین مایل به زرد نیز میگویند)؛ که رنگ مایل به زرد تولید می کند و ائوزین B (ائوزین مایل به آبی یا قرمز امپریالیستی) کمتر کاربرد داد و رنگ بسیار کم رنگ آبی یا مایل به آبی تولید می کند. این دو رنگ قابل تعویض هستند و استفاده از یکی یا دیگری بیشتر انتخابی است..
طرز تهیه محلول ائوزین:
محلول ائوزین Y را تهیه کنید. 2 گرم ائوزین Y محلول در آب را به 40 میلی لیتر آب دوبار تقطیر اضافه کنید و مخلوط کنید تا حل شود. سپس 160 میلی لیتر اتانول 95٪ اضافه کنید و مخلوط کنید. در دمای اتاق نگهداری شود.
اتیدیوم بروماید
اتیدیوم بروماید چیست؟ اتیدیوم بروماید (Ethidium Bromide) یک رنگ اینترکالکتینگ از جمله رنگ های بیولوژیکی بوده که به موجب آن DNA را رنگ نموده و یک فلورسنت به رنگ قرمز -نارنجی ایجاد میکند. اگرچه سلولهای سالم را رنگ نمیکند، اما میتواند برای شناسایی سلولهایی که در مراحل آخر آپوپتوز هستند و همچنین سلولها با غشاهای قابل نفوذ استفاده شود در نتیجه، از اتیدیم بروماید اغلب به عنوان نشانگر آپوپتوز در تجمع سلولها و رنگ آمیزی DNA در الکتروفورز ژل استفاده میشود. این رنگ همچنین ممکن است همراه با آکریدین اورنج (AO) در شمارش سلولهای زنده استفاده شود. رنگ ترکیبی اتیدیوم برماید-آکریدین اورنج باعث فلورسانس سبز سلولهای زنده میشود در حالیکه سلولهای آپوپتوتیک، فلورسانس قرمز- نارنجی تشخیصی را حفظ میکنند.
از آنجا که اتیدیوم بروماید می تواند با DNA متصل شود، به عنوان یک جهش زا بسیار سمی است که ممکن است به طور بالقوه اثرات سرطان زا یا تراتوژنیک ایجاد کند، اگرچه هیچ مدرک علمی نشان نمی دهد که بر روی سلامت اثر سو وجود داشته باشد. راه های قرار گرفتن در معرض اتیدیوم بروماید استنشاق، بلع و جذب پوست است. بعنوان جایگزین اتیدیوم بروماید در الکتروفورز رنگ سیف استین تولید شده است. برای خرید رنگ های سیف استین می توانید کلیک کنید.
اسید فوشین
از اسید فوشین (Acid Fuchsin) ممکن است برای رنگ آمیزی کلاژن ، عضله صاف یا میتوکندری استفاده شود. از رنگ فوشین به عنوان رنگ هسته ای و سیتوپلاسمی در روش تریکروم مالوری (Mallory’s Trichrome Method) استفاده میشود. این رنگ بیولوژیکی در برخی از انواع روش تریکروم ماسون (Masson’s Trichrome) سیتوپلاسم را رنگ میکند. در پیكروفوچشین ون گیزون (Van Gieson’s Picro-Fuchsine)، اسید فوشین رنگ قرمز خود را به الیاف كلاژن میدهد. فوچشین اسید نیز یک رنگ سنتی برای میتوکندری است (روش آلتمن).
هماتوکسیلین
هماتوکسیلین (Haematoxylin) یک رنگ هستهای است و با یک تثبیت کننده ، رنگهای هماتوکسیلین آبی- بنفش یا قهوهای هستهای استفاده میشود. این ماده اغلب با ائوزین در رنگ آمیزی H&E (هماتوکسیلین و ائوزین) استفاده میشود که یکی از متداولترین روشها در بافت شناسی است.
به طور معمول سه نوع رنگ آمیزی H&E وجود دارد: پیشرونده ، پیشرونده اصلاح شده و بازگشتی. رنگ آمیزی پیشرونده زمانی اتفاق می افتد که هماتوکسیلین به بافت اضافه شود بدون اینکه توسط یک تمایز دهنده برای از بین بردن رنگ اضافی دنبال شود.برای اطلاع از قیمت رنگ هماتوکسیلین ائوزین و خرید آن کلیک کنید.
ساخت رنگ هماتوکسیلین
800 میلی لیتر آب را بجوشانید و آلوم پتاس را به آن اضافه کنید تا حل شود.
4 گرم هماتوکسیلین را در 60 میلی لیتر اتانول مخلوط کنید. خوب تکان دهید تا حل شود.
وقتی پتاس حل شد اکنون محلول محلول هماتوکسیلین + اتانول اضافه کنید.
رنگهای هوچست
رنگ آمیزی هوخست: هوچست (Hoechst) یک ترکیب مشتق شده از بی-بنزیمیدازول است که به شیار مینور DNA متصل میشود. رنگهای هوچست که اغلب در میکروسکوپ فلورسانس برای رنگ آمیزی DNA استفاده میشود، هنگام حل شدن در محلولهای آبی، زرد به نظر می رسد و تحت تحریک UV (نور فرا بنفش)، نور آبی منتشر میکند. دو نوع عمده هوخست وجود دارد: Hoechst 33258 و Hoechst 33342. این دو ترکیب از لحاظ عملکردی شبیه به هم هستند، اما در ساختار تفاوت کمی دارند. Hoechst 33258 شامل یک گروه هیدروکسیل انتهایی است و بنابراین در محلول آبی محلولتر است، با این حال این ویژگیها توانایی نفوذ آن به غشای پلاسما را کاهش میدهد. این رنگ بیولوژیکی حاوی جایگزینی اتیل در گروه هیدروکسیل انتهایی (یعنی یک گروه اتیل) است که آن را آبگریزتر برای عبور آسان از غشای پلاسما میکند.
