سبد خرید 0
سبد خرید 0

روش انجام تست MTT و XTT

عناصر نادر زمین

خدمات سنجش میزان زنده ماندنی سلول و سمیت مواد با آزمایش MTT و XTT شرکت آرکا طب روهام

شرکت آرکا طب روهام (ATR) خدمات سنجش میزان زنده ماندنی سلول و سمیت مواد را با آزمایش MTT و XTT به‌صورت یک پانل جامع شامل نگهداری و پاساژ رده های سلولی، سنجش میزان زنده ماندنی سلول و سمیت مواد با آزمایش MTT و XTT، بررسی آپوپتوز با استفاده از کیت Annexin و بررسی چرخه سلولی با رنگ PI، جهت پاسخگویی به نیازهای تحقیقاتی مختلف ارائه می‌دهد. شرکت ATR به‌واسطه کارشناسان خبره خود توانسته است هزینه خدمات MTT و XTT را کاهش داده تا به شما در دستیابی به نتایج بهتر و صرفه‌جویی در زمان و هزینه کمک کند.

 

تست سمیت سلولی چیست؟ تست سمیت سلولی یکی از آزمایش های ارزیابی و غربالگری بیولوژیکی است که از سلول های بافتی در شرایط آزمایشگاهی برای مشاهده رشد سلول ها، تولید مثل و اثرات مورفولوژیکی توسط دستگاه های پزشکی استفاده می کند.مسمومیت سیتوتوکسی یکی از مهمترین شاخص ها برای ارزیابی بیولوژیکی در مطالعات آزمایشگاهی است.

در شرایط آزمایشگاهی، مواد شیمیایی مانند داروها و سموم دفع آفات دارای مکانیسم سمیت سلولی متفاوتی مانند تخریب غشای سلول، جلوگیری از سنتز پروتئین، اتصال غیرقابل برگشت به گیرنده ها و غیره است. به منظور تعیین مرگ سلول ناشی از این آسیب ها، نیاز تست سمیت سلولی ارزان قیمت، کوتاه مدت و  قابل اعتماد و قابل تکرار است. سمیت مواد شیمیایی و آزمایش زنده ماندن سلول بر اساس عملکردهای مختلف سلول است. طیف گسترده ای از روش های سمیت سلولی در حال حاضر در زمینه های سم شناسی و داروسازی استفاده می شود. طبقه بندی های مختلفی برای این سنجش ها وجود دارد:

  • (i) سنجش های حذف رنگ
  • (ii) سنجش های رنگ سنجی 
  • (iii) سنجش های فلورومتری 
  • (IV) سنجش های نورسنجی

انتخاب روش مناسب در بین این روش ها برای دستیابی به نتایج دقیق و قابل اعتماد مهم است. هنگام انتخاب انجام تست mtt و سنجش زنده ماندن سلول برای استفاده در مطالعه، باید پارامترهای مختلفی از جمله در دسترس بودن در آزمایشگاهی که قرار است مطالعه انجام شود ، ترکیبات آزمایش، مکانیسم تشخیصی ، ویژگی و حساسیت در نظر گرفته شود.

به طور خلاصه روش انجام تست MTT و XTT در ادامه مشاهده می کنید.

روش انجام تست MTT

سلول ها را انکوبه کنید.
1. به هر چاه 100 میکرولیتر سلول اضافه کنید و به مدت 2-3 روز انکوب کنید.
توجه: از تراکم سلولی ثابت استفاده کنید که 5000 تا 10 هزار سلول در هر چاه باشد.
توجه: زمان انکوباسیون بسته به رده سلول و تراکم سلول متفاوت خواهد بود.

محلول استوکMTT را تهیه کنید.
2. 5 میلی گرم MTT را در 1 میلی لیتر 1X PBS حل کنید. با فیلتراسیون استریل کنید.

برچسب زدن سلول ها با MTT
3. به هر چاه 10 میکرولیتر محلول سهام MTT اضافه کنید.
4. به مدت 2-5 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه کنید.

حل کردن فرمازان
5. بدون ایجاد مزاحمت برای سلولها ، محتوا را با احتیاط از هر چاه خارج کنید.
6. به هر چاه 100 میکرولیتر DMSO اضافه کنید و با پیپت بالا و پایین کنید تا خوب مخلوط شود.
توجه: حتماً 100 میکرولیتر DMSO را به یک چاه بدون سلول اضافه کنید.
7. به مدت 15 دقیقه در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوب کنید.

میزان جذب را اندازه گیری کنید
8. بلافاصله جذب را در 570 نانومتر اندازه گیری کنید.

 

روش انجام تست XTT

سلول ها را انکوبه کنید
1. به هر چاه 100 میکرولیتر سلول اضافه کنید و به مدت 2-3 روز انکوبه کنید.
آ. از تراکم سلولی ثابت استفاده کنید که 5000 تا 100000 سلول در هر چاهک باشد.
ب. زمان انکوباسیون بسته به رده سلول و تراکم سلول متفاوت خواهد بود.
ج. حتماً کنترل سلول های تریت نشده و خالیبدون سلول داشته باشید.

محلول PMS و XTT را آماده کنید
2. محلول PMS را با حل کردن 3 میلی گرم PMS در 1 میلی لیتر 1X PBS آماده کنید.
3. محلول XTT را با محلول 4 میلی گرم XTT در 4 میلی لیتر محیط کشت سلولی تهیه کنید.

برچسب زدن سلول ها با XTT
4- برای ایجاد ردیابی، 10 میکرولیتر از محلول PMS را به 4 میلی لیتر محلول XTT اضافه کنید.
5- بلافاصله 50 میکرولیتر محلول تشخیص ساخته شده در مرحله قبل را به هر چاهک اضافه کنید.
6. به مدت 2-5 ساعت در دمای 37 درجه سانتیگراد انکوبه کنید.

میزان جذب را اندازه گیری کنید.
7. واکنش را برای مدت کوتاهی روی شاکر قرار دهید تا رنگ در محلول مخلوط شود.
8. بلافاصله جذب را در 450 نانومتر اندازه بگیرید.

تفسیر داده ها
سنجش تکثیر سلولی

  1. خواندن میانگین تکراری برای هر نمونه.
    پس زمینه محیط کشت را از قرائت سنجش خود کم کنید. این  جذب صحیح است..
  2. میزان جذب متناسب با تعداد سلول است.
  • برای شمارش سلول می توان یک منحنی استاندارد با تعداد سلول شناخته شده و زمان های انکوباسیون ثابت با معرف سنجش ایجاد کرد.

سنجش سمیت سلولی سلول

  1. خواندن میانگین تکراری برای هر نمونه.
  2. پس زمینه محیط کشت را از قرائت سنجش خود کم کنید. این  جذب صحیح است.
  3. محاسبه درصد سمیت سلولی با معادله زیر، با استفاده از جذب تصحیح شده:

٪ سمیت سلولی = (100 x (شاهد – نمونه))

محصول با موفقیت به سبد خرید اضافه شد.